1. 产品概述

微生物转谷氨酰胺酶经常用于实现特定的偶联目的。其工作原理是催化脱糖抗体第295位谷氨酰胺侧链与底物中的伯胺之间形成稳定的肽键。因为不需要额外的肽供体来促进偶联反应，只要目标分子上存在伯胺基团，MTGase即可发挥作用，而不受其他结构特性的限制。在单克隆抗体的每个重链的Fc区域，谷氨酰胺残基是其天然组成部分。当第295位的糖基被去除后，通过MTGase介导的反应，谷氨酰胺残基能与底物进行偶联，生成具有均一DAR（药物抗体比）=2的ADC（抗体偶联药物）。为了提高偶联效率和DAR值，可以使用带有支链的连接子进行偶联，从而实现DAR的倍增。此外，将第297位的天冬酰胺突变为谷氨酰胺也是增加DAR的另一种策略。与其他酶技术相比，MTGase具有显著的灵活性。

图 1. MTGase工作原理

2. 产品特点

− 高特异性偶联：可实现对特定位点的精确修饰，有助于减少非特异性偶联。

− 偶联效率高：可以在oligo-G上连接各种类型的分子，实现与抗体特定位点的有效偶联。

− 偶联可控性：通过调整MTGase的作用条件和偶联策略，可以实现对DAR值的精确控制。

− 产物同质性：可以避免抗体特定位点突变的复杂性有助于保持ADC药物结构的完整性和同质性。

3. 产品规格

4. 储存条件

-80℃冰箱储存，避免反复冻融。【建议首次开启试剂盒后，根据需要进行分装】。

5. 参考实验流程

(1) 用1xPBS先将mAb浓度调整为1mg/mL，再按照摩尔比mAb:氨基叠氮=1:100，质量酶活比mAb:氨基叠氮=1mg:6U，投料，加入到15ml离心管中混匀；放置于恒温金属浴上25℃，转速250rpm，25℃过夜（18h）。

(2) 将反应后的产物，经Protein A上柱挂样，最后用柠檬酸钠缓冲液（pH=2.85），洗脱。用0.1M NaOH中和至中性。将样品转移至10kD超滤离心管中（2500xg，10min），将缓冲液置换为PBS，浓度调整为1mg/mL。

(3) 将mAb:氨基叠氮化合物和DBCO-MMAE，按照摩尔比1:6，在15ml离心管中混匀，30℃，转速250rpm，偶联4h；

(4) 取样，进行HIC及SEC分析。

6. 注意事项

− MTGase酶催化天然的抗体的Fc的Gln295与氨基叠氮发生反应时，会受到Fc段Asn297糖基化的影响，导致偶联效率降低，建议对Asn297进行去糖基化处理，以增强MTGase酶催化活性

− 反应中，mAb与氨基叠氮摩尔比可根据实验要求进行调整

7. 展示数据：MTGase偶联氨基叠氮及DBCO-MMAE实验）

图示说明：偶联结果显示MTGase能够很好的催化抗体与:氨基叠氮反应，并进一步与DBCO-MMAE反应。最终的偶联产物中，DAR值为3左右。