1. 产品概述

Sortase A (SrtA) 是一种细菌酶，在抗体药物偶联物（ADCs）的开发中扮演了重要角色，其主要功能是催化转酰胺反应，使各种功能基团能够精确地附着在蛋白质上。Sortase A 的机制包括识别目标蛋白上的特定肽序列，通常是 LPXTG（X 可以是任何氨基酸），并在苏氨酸（T）和甘氨酸（G）残基之间进行切割。此切割暴露了一个反应性苏氨酸残基，然后该残基可以与寡聚甘氨酸修饰的底物形成新的肽键，从而允许多种分子的附着，包括药物、荧光团和其他标签。本产品为钙离子依赖型Sortase A工具酶

图示说明：Sortase A工作原理

2. 产品特点

− 高效催化活性：能够高效特异性地催化特定序列的蛋白质或多肽之间的共价连接反应，反应条件温和，不破坏底物的结构和功能

− 特异性识别序列：Sortase A酶能够识别多种含有LPXTG序列的底物，并将它们与各种含有甘氨酸的受体连接起来，适用于不同的蛋白质和多肽

− 温和的反应条件：在生理条件下（如中性pH、室温）即可发挥作用，避免了极端条件对蛋白质或多肽的破坏。

− 可调控的反应条件：通过调节钙离子浓度、底物浓度和反应时间，可以精确控制Sortase A酶的催化反应，提高反应效率和产率

3. 产品规格

4. 储存条件

-80℃冰箱储存，避免反复冻融。【建议首次开启试剂盒后，根据需要进行分装】。

5. 参考实验流程

1）材料

抗体：1mg/ml in 50mM L-组氨酸 100mM NaCl 30mg/ml 甘露醇  pH=7.5

Sortase A：1mg/ml in 50mM L-组氨酸 100mM NaCl 30mg/ml 甘露醇  pH=7.5

目标小分子：10mM in DMSO

CaCl2：0.5M in Water

2）实验步骤

取抗体（1ml）加入到1.5ml离心管，加入Sortase A （100μl）、氯化钙（ 10μl）、目标小分子（6.6μl ）。将反应放置于恒温金属浴上，25℃、转速200rpm、反应8h。取样进行HPLC分析。。

6. 注意事项

−  弱碱性条件下有利于偶联反应的进行；

−  钙离子依赖性活性酶，避免使用磷酸盐体系，磷酸钙为沉淀；

−  建议使用50mM L-组氨酸 100mM NaCl pH=6.5-8.0体系进行反应。

−  目标小分子一端含GGG

7. 展示数据：Sortase A催化偶联

图示说明：0.05eq Sortase A（0.5mg/ml）反应8小时后，偶联产物占比74%。纯化后偶联产物占比98%。