慢病毒包装质粒mix

【用途】

本产品为重组慢病毒包装辅助质粒混合物,爱康得将慢病毒包装所需的元件分别置于多个不同的质粒中,大幅度降低重组慢病毒重组为具有复制能力病毒的概率,相对于常规的第三代慢病毒包装系统更进一步提高了生物安全性;同时对各个质粒的比例进行了优化,大幅度提高重组病毒的产出率。

【组成】

本产品为混合质粒,含有重组慢病毒包装所必须的元件。本产品附赠的Lenti-GFP为对照质粒,可以结合Lentivirus packaging mixLenti-GFP制备对照慢病毒。

【使用方法】

1. 准备15cm细胞培养皿,接种5*106个细胞/皿,加入完全培养基(DMEM高糖、10%FBS),置于37°C、5% CO2培养箱,过夜培养。

2.  从冰箱中取出转染试剂LVTransm及慢病毒包装质粒(Lenti-GOI、Lenti-Mix),室温解冻后,用移液枪上下吹打完全混匀。取出PBS或HBSS缓冲液,温热至室温。取2mL PBS至6孔板的一个孔,分别加入20μg Lenti-GOI、30μL Lenti-Mix,移液枪上下吹打充分混匀后,加入50μL LVTransm,立即用移液器上下吹打混匀,室温下静置10-15分钟。

3. 将上述转染复合物逐滴加入到15cm培养皿中,轻轻晃动培养皿,充分混匀。将培养皿置于37°C、5% CO2培养箱,培养6~8小时后,将含有转染试剂的培养基去掉,更换为新鲜的完全培养基,将培养皿重新放回培养箱中继续培养。

4. 连续培养24小时后,收集培养皿中含有病毒的培养基上清至一个50mL离心管中;向培养皿内重新加入25mL左右新鲜的完全培养基,继续培养24小时;

5. 收集培养皿中含有病毒的培养基上清至50mL离心管中;向培养皿内重新加入25mL左右新鲜的完全培养基,继续培养24小时;

6. 收集培养皿中含有病毒的培养基上清,并与前面收集的两次培养基上清混合;

7. 用0.45um的PES材质滤膜将过滤后,将滤液转至无菌离心管中,配平后,50000 xg 4°C离心2小时。离心结束后,在生物安全柜中,小心将离心管中的液体吸去,加入400ul PBS缓冲液将沉淀重悬,将病毒置于-80°C保存。


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