PD-1，也被称为程序性细胞死亡蛋白1或CD279(分化簇279)，是一种细胞表面受体，为免疫球蛋白超家族成员，在T细胞和B细胞上表达。PD-L1作为PD-1最重要的配体，几乎在所有的肿瘤细胞系中都有表达。PD-1作为一种免疫检查点，参与多种肿瘤的进展。PD1与PD-L1结合后可抑制CD4阳性T细胞和CD8阳性T细胞的增殖和活化，同时介导白介素（IL）-2和干扰素（IFN）-γ分泌的下调，最终抑制T细胞免疫功能，形成免疫抑制肿瘤微环境，使肿瘤细胞获得免疫逃逸。

通过阻断PD1/PD-L1信号传导通路可逆转免疫抑制肿瘤微环境，恢复T细胞的抗肿瘤活性，增强机体免疫系统抗肿瘤作用^【1】。目前多项临床研究^【2-4】已验证，阻断PD1/PD-L1通路具有良好的抗肿瘤效果。

爱康得生物致力于肿瘤抗体药物的研发，我司自主构建了PD-1 / PD-L1阻断活性检测报告基因系统，该报告基因法可用于测定不同种类的抗PD-1 /PD-L1 mAb的生物活性。该实验包含两个基因工程细胞系：

• PD-1效应细胞：表达human PD-1和NFAT-RE的Jurkat细胞

• ^aAPCCHO-PDL1细胞：表达human PD-L1和CD3抗体的CHO细胞。

当Jurkat效应细胞和^aAPCCHO-PDL1共培养时，PD-1 / PD-L1相互作用会抑制TCR信号传导和NFAT-RE介导的发光。添加具有阻断活性的PD-1或PD-L1抗体会释放抑制信号，导致TCR激活和NFAT-RE介导的发光（如下图），可以使用Bio-Glo™试剂进行检测和定量。

图示说明：当两种细胞共同孵育时, CHO细胞表面抗CD3ScFv 和Jurkat 细胞的膜CD3 分子结合, 向内传递活化信号, 而CHO 细胞表面PD-L1 和Jurkat 细胞表面的PD-1 分子结合, 抑制活化信号的传递, 荧光素酶报告基因不能表达。用这两种细胞模拟了T细胞激活受到PD-1 信号通路抑制的机制, 当加入抗PD-1/PD-L1 抗体时, 阻断PD-1 和PD-L1 的结合, 使CHO 细胞表面抗CD3ScFv和Jurkat 细胞的膜CD3分子结合传递活化信号, NFAT 驱动的荧光素酶报告基因得以表达。

案例展示：

参考文献：

1.Ma W, Gilligan BM, Yuan J, et al. Current status and perspectives in translational biomarker research for PD-1/PD-L1 immune checkpoint blockade therapy. J Hematol Oncol. 2016;9(1):47. DOI: 10.1186/s13045-016-0277-y

2.Fehrenbacher L, Spira A, Ballinger M, et al. Atezolizumab versus docetaxel for patients with previously treated non-small-cell lung cancer (POPLAR): a multicentre, open-label, phase 2 randomised controlled trial. Lancet. 2016;387(10030):1837-1846. DOI: 10.1016/S0140-6736(16)00587-0

3.Motzer RJ, Escudier B, McDermott DF, et al. Nivolumab versus Everolimus in Advanced Renal-Cell Carcinoma. N Engl J Med. 2015;373(19):1803-1813. DOI: 10.1056/NEJMoa1510665

4.Herbst RS, Baas P, Kim DW, et al. Pembrolizumab versus docetaxel for previously treated, PD-L1-positive, advanced non-small-cell lung cancer (KEYNOTE-010): a randomised controlled trial. Lancet. 2016;387(10027):1540-1550. DOI: 10.1016/S0140-6736(15)01281-7